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RNA提取原理

RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

抽提RNA的使用目的

RNA用于不同的后续实验,其质量要求不尽相同。

cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留;

Northern对RNA完整性要求较高,对酶反应抑制物残留要求较低;

RT-PCR对RNA完整性要求不太高,但对酶反应抑制物残留要求严格。因此,明确实验目的是进行后续实验的首要条件。